河北惠利生物科技有限公司

产气荚膜梭菌“牛奶发酵”的原理与操作方法

发表时间:2021-10-26 10:53

“牛奶发酵”是产气荚膜梭菌的重要生化特征之一。我们在操作时会遇到各种问题,导致实验失败。下面小编就关于这项实验和小伙伴们简单探讨一下,希望能为大家解决这一难题。

图片

“牛奶发酵”实验使用含铁牛奶培养基。


图片

检验原理


产气荚膜梭菌能分解乳糖产酸,使酪蛋白凝固,同时产生大量气体,将凝固的酪蛋白冲成蜂窝状,有时可将液面向上推挤,甚至会冲开试管帽,称为“暴烈发酵”。



操作步骤

1

配制


灭菌温度和时间严格按照标签要求操作,灭菌后迅速冷却(宜现用现配)。

2

接种


取生长旺盛的新鲜FTG培养液1ml,深入培养基底部进行接种。

3

培养


46℃±0.5℃水浴培养,水浴培养时确保水面高于培养基液面。

4

结果观察


46℃±0.5℃水浴培养2 h后,每小时观察一次,观察至5h。

5

结果判断


5h内不发酵者为阴性,有“暴烈发酵”现象者为阳性。


培养基质控

(GB 4789.28-2013)

图片

图片

注意事项



图片


1.

菌株生长状态

图片

使用生长旺盛的新鲜菌,是实验成功的关键一步。

图片

FTG培养基培养结果

(左:生长良好;右:空白)



2.

硫乙醇酸盐流体培养基(FTG)的使用

图片

FTG培养基高压灭菌后若不及时使用,成分中的刃天青可使氧化层由浅黄色变为粉红色,接种前,观察培养基氧化层高度不得超过培养基深度的1/3,否则,使用前需要脱氧。

FTG脱氧方法:100℃水浴加热至粉红色消失(不超过20分钟),迅速冷却,只限加热一次,并防止被污染。


3.

灭菌

图片

配制含铁牛乳培养基时,我们常遇到一些灭菌锅灭菌完成后,需要等待一段时间才能取出培养基,这时,取出的培养基就已经是凝固的状态,无法使用。



针对这种情况,小编采取三种方式配制含铁牛奶培养基,模拟可能遇到的不同情况,并进行了接菌实验:


A

加热煮沸至完全溶解,每个试管分装10mL培养基,115℃灭菌10min,迅速冷却后待用。


B

  加热煮沸至完全溶解,每个试管分装10mL培养基,115℃灭菌10min,自然冷却后待用。(模拟高压锅不能及时打开)


C

采用煮沸灭菌的方法配置培养基,无菌操作下,试管分装10mL培养基待用(试管需提前灭菌)。


三种灭菌效果的空白管:

图片


接菌实验结果:



图片



总结

采用煮沸灭菌的培养基和严格按照标签灭菌并迅速冷却的培养基可获得正确的实验结果,若使用已经凝固的培养基进行暴烈发酵实验,可能导致结果异常。


4.

储存

图片

建议储存条件为阴凉干燥处,开封后尽量做好密封。在配制培养基时,可以先闻一下培养基的气味,应是脱脂奶粉的香气,如有异味,培养基可能已发生变质,不建议使用。




分享到:
13911843567@163.com
0315-2320887
河北省唐山市站前路金凯悦商务中心B611