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微生物实验室培养基、试剂的应用与管理问题解析

发表时间:2021-09-13 16:03作者:北京陆桥

问题答疑




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1、培养基验证的菌液浓度如何确认,有几种方法便捷可行?

可购买已知浓度的定量菌株,若商业派生定量菌株无法满足要求,实验室可自行准备。准备方法如下:待测菌株进行活化培养得到菌株原液,将原液进行10倍梯度稀释,对稀释液采用倾注法进行计数,根据计数结果选择所需稀释液即可。

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2、琼脂含量千分之15是固体培养基么?

在液体培养基中加入一定量固化物(如:琼脂、明胶等),加热至100℃溶解,冷却后凝固成固体状态的培养基。琼脂含量千分之15为固体培养基。

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3、开封后的培养基有效期也是三年?

未开封保质期3年。不同培养基开封后保存状态会有所不同,可依据培养基理化状态进行初步判断,若没有颜色改变或者严重结块均可使用;若开封时间过长可进一步采用微生物性能测试方法进行验收,验收合格均可使用。

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4、灭菌后调pH怎么保证不污染?

购买的商品化培养基,pH值已经符合标准要求了,无需自行调节。如需要调节,使用无菌的1mol/L的盐酸和氢氧化钠,调节过程中准备两瓶无菌培养基,其中一瓶用于调测,另外一瓶依据调测结果添加相应无菌1mol/L的盐酸和氢氧化钠即可。

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5、体积多大算是大体积?

一般体积超过1000mL即为大体积。

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6、培养基灭菌后有必要测pH吗?灭菌后的pH 25度就凝固了,怎么测

购买的商品化培养基,pH值已经符合标准要求了,但是日常也可以进行监测。固体培养基冷却至25℃为固体状态,可以使用固体电极进行测定。

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7、参比培养基怎么确定

品种选择:一般附录均会给出,若附录外培养基可遵循以下建议:细菌培养用采用TSA,霉菌和酵母培养用采用沙氏葡萄糖琼脂,对营养有特殊要求的微生物采用适合其生长的不含抑菌剂或抗生素的培养基。

批次选择:参比培养基应选择近期批次中质量良好的培养基或是来自其他供应商的具有长期稳定性的批次培养基或即用型培养基。
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8、半定量在划线时,一般会长成一片,尤其是用枯草芽孢杆菌,如何降低这种情况的出现

划线时接种环与平板之间选择合适的角度,每条线之间的间隔可以适当加宽。平板可以适度干燥,减少蔓延的发生。

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9、如果培养基的采购量是半年的使用量,那么后续使用还需要定期做性能测试吗?

同一批次的有效期内的培养基进行一次性能测试即可。

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10、VRBA做生长率时标准写的是大肠埃希氏菌与弗氏柠檬酸杆菌,这两种菌选其一可以吗

两株菌都需要,标准要求两者G值均大于等于6。

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11、BGLB接种的管数是否有要求?具体的管数是多少

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依据质控要求需要使用三株质控菌株,每株菌两管平行,培养同时需要一只空白的对照,所以至少7管培养基。

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12、在选择质控菌株时,有几株时,什么时候可以选择其中的几个或一个呢

标准指出“不含指示剂的培养基可采用一株阳性菌株测试”,但是为了实验结果的可靠性建议使用附录中所有菌株。

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13、标准菌株在做培养基质控同时是否还需要划平板对它做生化鉴定

工作菌株在使用前需要使用合格的培养基进行确认,而不要和培养基验收放在一起进行验收。

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14、有些培养基在附录D和E中,没有指出,比如铜绿假单胞菌检测的相关培养基,应该如何做培养基的验收?其次,目前,培养基厂商提供的第三方培养基质检报告,在资质认定或CNAS评审中,评审专家们的主要态度会是怎么样的?有些人说,如果有这个第三方质检报告,实验室就可以不用再做培养基技术性验收

如果附录中不含的培养基可依据标准文本的规定进行菌株以及方法的选择进行验收,或者依据厂商质控报告中采用的方法进行验收实验。第三方报告的认可问题,CNAS文件中指出“当有足够数据证明其可信性时,验收的技术性指标可以减少”依据本原则对培养基进行验收时可相对简化。

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15、大肠菌群验证混浊就是阳性还是必须得产气?

主要判断依据表E,从表E中可以得知进行大肠菌群检测用的培养基评定标准为浑浊度为2且管内有气体。

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16、老师好,请问菌株培养过夜,然后10的-3次方稀释,过夜是多长时间

一般细菌进行18-24h培养即可得到108-109CFU/mL,10-3稀释液中含菌量大致为105-106CFU/mL。

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17、培养基销毁有什么方法?

培养过后培养基销毁前需要进行灭菌处理,采用121℃/30min,无菌处理后依据SDS进行销毁。

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18、培养基pH多大频次检测一次合适,根据工作安排什么时候检测pH更合适呢

pH测定一般一个批次进行一次验收即可,若配制用水、高压锅以及配制过程发生改变时需要重新测定。

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19、培养基灭菌后保存时间?要自己验证吗?

不同培养基保存条件不同,一般4℃保存一周内使用,若时间较长需要进行验证。具体可参考GB4789.28-2013 3.4.4章节。

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20、老师,培养基在65度干燥箱里可以放多长时间?

培养基配置后不能及时使用可置于50-55℃保存,不超过4h。65℃温度较高。

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21、PALCAM培养基容易划破?

培养基过软可能会影响划线操作,可能因素与培养基质量、灭菌方式、最终pH有关。

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22、消毒餐具大肠菌群检验用大肠菌群快速检验纸片的技术性验收记录怎么编写呢

测试片验收目前没有标准依据,可以根据其用途分类进行验收,建议参考VRBA培养基验收方法进行。


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